CUT&Tag 是一种新兴的 DNA- 蛋白质互作研究方法，它可以在大部分情况下替代传统ChIP-Seq技术。CUT&Tag以融合protein A/G的Tn5转座酶为核心，通过protein A/G与抗体结合，使Tn5被富集在靶点周围，从而可以在目的位点附近进行酶切反应并同时引入接头序列，产物DNA经过后续提取与PCR扩增后，得到可以直接用于测序的文库。
CUT&Tag实验不需要超声片段化，也不需要传统的末端修复和接头连接反应，操作简单、时间短、数据信噪比高、重复性好、细胞用量少。
湖南若鱼生物可承接CUT&Tag技术服务，包括文库构建+高通量测序+数据分析。
CUT&Tag实验首先利用刀豆素A磁珠（ConA beads）结合糖蛋白的性质将细胞固定在磁珠上；然后使用Digitonin将细胞通透化以便于抗体进入；之后加入Protein A-Tn5-ME转座酶复合物，通过protein A与抗体结合，使Tn5被富集在靶点周围。Tn5是Mg2+依赖酶并且带有文库接头序列（ME），在Mg2+存在下可发挥活性，在结合位点附近的DNA上进行酶切反应并同时连接上接头序列，产物DNA经过后续提取与PCR扩增后，得到可以直接用于测序的文库。
文章题目：G-quadruplexes on chromosomal DNA negatively regulates topoisomerase 1 activity
发文单位：湖南大学
发表时间：2024年2月10日
发表期刊：Nucleic Acids Research（IF=14.9）
原文链接：https://academic.oup.com/nar/advance-article/doi/10.1093/nar/gkae073/7606261?login=true
本研究中使用湖南若鱼生物提供的CUT&Tag试剂盒，检测了靶向G-四链体小分子处理细胞前后，染色体DNA上Top1蛋白结合信号以及R-loop信号的变化。
图6. 靶向G-四链体的化学分子ZnTTAPc置换出被染色体G-四链体捕获的Top1进而减少R-loop的形成。（D，E）使用anti-Top1抗体（ab109374, Abcam）以及湖南若鱼生物的CUT&Tag试剂盒检测染色体DNA上的Top1结合位点。（F，G）使用R-loop抗体（S9.6, Abcam）以及湖南若鱼生物的CUT&Tag试剂盒检测染色体DNA上的R-loop形成位点。
湘公网安备43019002001881号